پایان نامه های انجام شده درباره بیوتکنولوژی- فایل ...

ارسال شده در 17 آذر 1400 توسط نجفی زهرا در بدون موضوع

۸- ریختن رسوبات داخل میکروتیوپ

شکل ۳- ۱۲ مراحل تهیه ی رسوب مخمر از محیط کشت مایع غنی سازی مخمر

کشت در محیط های انتخابی مایع
تهیه استوک اولیه مخمرها برای کشت در انواع محیطهای کشت مخمری

( اینجا فقط تکه ای از متن فایل پایان نامه درج شده است. برای خرید متن کامل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. )

ابتدا ۳۵ میلی گرم از کلنی مخمری (یا توده زیستی) به میکروتیوپ منتقل شده و ۳۵۰ میکرولیتر سرم فیزیولوژی به آن افزوده و مخلوط شد. این مقدار به ۳ قسمت ۱۰۰ میکرولیتری تقسیم گشت و ۵۰ میکرو لیتر باقی مانده برای شمارش تعداد سلولهای مخمری اولیه نگهداری شد.
۳-۶-۲ محیط کشت مایع YPD
با توجه به اینکه محتویات محیط کشت برای تهیه حجم یک لیتر شامل: عصارهی مخمر ۱% به میزان ۱۰ گرم، پپتون ۲% به مقدار۲۰ گرم و دکستروز (گلوکز) ۲% به مقدار۲۰ گرم میباشد، نکتهی شایان ذکر در تهیه این محیط آن است که ابتدا عصارهی مخمر و پپتون در حجم مورد نیاز آب دیونیزه مخلوط شد و در اتوکلاو ۱۲۱ درجه به مدت ۱۵ دقیقه قرار گرفت و پس از اتمام استریلاسیون، محتویات محیط کشت در دمای ۵۵ درجه ی سانتی گراد قرار گرفته و نهایتاً مقدار دکستروز (گلوکز) با فیلتر وارد محتویات استریل، شد و در شرایط کاملاً استریل ۱۰ میلی لیتر از محیط به داخل لولههای آزمایش انتقال داده شد تا آمادهی کشت نمونههای مخمری گردند (شکل ۳-۱۳و ۳-۱۴).
شکل ۳- ۱۳ افزودن دکستروز توسط فیلتراسیون برای تهیه محیط کشت YPD
شکل۳- ۱۴ محیط کشت مایع YPD (سمت راست پس از تلقیح نمونه ی مخمری، سمت چپ قبل از تلقیح)
۳-۶-۳ محیط کشت مایع YPAD
محتویات این محیط برای یک لیتر شامل: عصاره ی مخمر۱% به میزان ۱۰ گرم، پپتون۲% به مقدار ۲۰ گرم، دکستروز (گلوکز)۲% به مقدار ۲۰ گرم و آدنین همی سولفات ۰٫۰۰۴% به مقدار ۴۰ میلی گرم میباشد. عصارهی مخمر و پپتون و آدنین همی سولفات با توجه به دستورالعمل فوق با آب دیونیزه ترکیب شد و در دمای ۱۲۱ درجه به مدت ۱۵ دقیقه اتوکلاو گشت. پس از اتمام اتوکلاو در دمای ۵۵ درجه خنک شد، سپس دکستروز با فیلتراسیون به محلول اضافه گشت. در شرایط کاملاً استریل ۱۰ میلی لیتر از محیط را به داخل لولههای آزمایش انتقال داده تا آمادهی کشت مخمرها گردند (www.clontech.com).
۳-۶-۴ محیط DM (Diatom Medium)
ترکیب و محتویات محیط کشت DM در جدول ذیل خلاصه شده هست (جدول ۳-۲).
جدول ۳-۲ محتویات محیط کشت