برای اعمال تیمار اتفن، اول ۱۵۰ میلی گرم و ۳۰۰ میلی گرم از ماده اتفن را وزن کرده و بعد از حل کردن این نسبت ها در داخل الکل هر کدام از نسبت های ۱۵۰ میلی گرم و ۳۰۰ میلی گرم، به حجم یک لیتر آب مقطر رسانده شد و برای تیمار شاهد فقط از آب مقطر استفاده شد. بنابراین خوشه های ۹ بوته انگور رقم ریش بابا قرمز در زمان تغییر رنگ حبه ها به طور تصادفی با غلظت های (صفر، ۱۵۰ و ۳۰۰ میلی گرم در لیتر) اتفن تیمار گردید. محلول پاشی با بهره گرفتن از سمپاش دستی در ساعات اولیه صبح صورت گرفت.

(( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. ))

۳- ۳- طرح آزمایشی
آزمایش بصورت فاکتوریل در قالب طرح پایه ی بلوک های کامل تصادفی با ۶ تیمار (۶=۳×۲)، فاکتور اول حلقه برداری در دو سطح (بدون حلقه برداری و حلقه برداری) و فاکتور دوم، اتفن در سه سطح با غلظت های (صفر، ۱۵۰ و ۳۰۰ میلی گرم در لیتر) در مرحله تغییر رنگ حبه ها اعمال گردید. هر تیمار شامل ۳ تکرار بوده که در مجموع دارای ۱۸ واحد آزمایشی (۱۸=۳×۶) بوده است و در هر تکرار ۶ خوشه انگور مورد بررسی قرار گرفت. برداشت محصول در پایان فصل رشد، همزمان با برداشت این رقم انگور در منطقه انجام و برای اندازه گیری صفات مورد مطالعه به آزمایشگاه واقع در ایستگاه تحقیقات و آزمایشگاه گروه باغبانی دانشکده کشاورزی دانشگاه ارومیه انتقال داده شد.
۳- ۴- آزمون‌های کیفی میوه
برداشت محصول در پایان فصل رشد، همزمان با برداشت این رقم انگور در منطقه انجام و برای اندازه گیری صفات مورد مطالعه به آزمایشگاه واقع در ایستگاه تحقیقات و آزمایشگاه گروه علوم باغبانی دانشکده کشاورزی دانشگاه ارومیه انتقال داده شد. صفات مورد بررسی در این آزمایش شامل: درصد مواد جامد محلول^[۸۶](TSS)، میزان اسیدیته قابل تیتراسیون^[۸۷]، ضریب رسیدگی میوه، pH عصاره میوه، میزان سفتی بافت میوه^[۸۸]، تغییرات رنگ میوه^[۸۹]، ترکیبات فنولی کل^[۹۰]، تعیین فعالیت آنتی اکسیدانی کل^[۹۱]، درصد ریزش حبه، اندازه (طول و عرض) خوشه، وزن خوشه و همچنین وزن ۲۰ حبه بودند.
۳- ۴-۱- اندازه‌گیری مواد جامد قابل حل کل عصاره میوه (TSS)
برای این منظور چند قطره از آب میوه در دمای اتاق روی رفراکتومتر دستی مدل ATAGO قرار گرفت و عدد مربوطه از روی ستون مدرج قرائت شد. البته قبل از شروع اندازه‌گیری رفراکتومتر کالیبره گردید و سپس اقدام به خواندن رفراکتومتر شد و داده‌ها برحسب بریکس یاداشت گردید.
۳- ۴-۲- اندازه‌گیری اسیدهای قابل تیتراسیون (TA)
برای اندازه‌گیری اسیدهای قابل تیتراسیون ابتدا ۱۰ میلی‌لیتر از عصاره میوه در داخل ارلن‌مایر ریخته شد و روی آن۲۰ تا ۴۰ میلی‌لیتر آب مقطر اضافه شد و سپس با قرار دادن الکترود pH متر دیجیتالی مدل (pH-Meter CG 824) عمل تیتراسیون توسط هیدروکسیدسدیم۱/۰ نرمال (۴ گرم در لیتر) تا ۲/۸ =pH صورت گرفت (Ayala-zavala., 2007). بر اساس مقدار هیدروکسید سدیم مصرفی در جریان تیتراسیون مقدار اسید موجود در عصاره میوه به صورت گرم اسید در ۱۰۰ میلی‌لیتر عصاره میوه (گرم در ۱۰۰ میلی‌لیتر) محاسبه شد. مقدار اسیدیته قابل تیتراسیون برحسب معادل اسید تارتاریک (اسید غالب انگور) طبق فرمول زیر محاسبه شد:

TA= مقدار اسیدهای آلی موجود در عصاره میوه (ml 100g/)
S = مقدار NaOH مصرف شده (ml)
N = نرمالیته NaOH
F = فاکتور NaOH
C = مقدار عصاره میوه (ml)
E = اکی والان اسید مورد نظر (اسید تارتاریک)
نرمالیته عبارت است از تعداد اکی‌والان گرم از جسم حل شده در یک لیتر محلول، اکی‌والان گرم جسم برابر است با مولکول گرم جسم تقسیم بر ظرفیت مؤثر آن جسم.
فاکتور یا ضریب نرمال جسم عبارت است از تعداد اکی‌والان جسم در یک لیتر. بنابراین فاکتور محلول­‌های نرمال مساوی یک می‌باشد. در معادله بالا برای تعیین نوع اسید‌ آلی باید اکی‌والان گرم آن اسید در معادله نوشته شود که اکی و‌الان اسید تارتاریک۰۷۵/۰ گرم می‌باشد (جلیلی‌مرندی، ۱۳۸۳).
۳- ۴-۳- اندازه گیری ضریب رسیدگی میوه (TSS/TA)
برای اندازه گیری ضریب رسیدگی میوه از نسبت مواد جامد محلول به اسیدهای قابل تیتراسیون استفاده شد.
۳- ۴-۴- اندازه گیری pH آب میوه
pH آب میوه با دستگاه pH متر دیجیتالی مدل (pH-Meter CG 824) کالیبره شده با بافرهای ۴ و ۷ اندازه گیری شد.
۳- ۴- ۵- تعیین سفتی بافت میوه
برای تعیین سفتی بافت نمونه های انگور، از دستگاه تجزیه و سنجش بافت (Texture analyzer) مدل TA-XTPlus (ساخت کمپانی استیبل میکرو سیستم انگلستان) استفاده شد. بدین منظور ابتدا سرعت جابجایی پروب در روی یک میلی متر بر ثانیه تنظیم شد. آزمون نفوذ فشارشی با میزان جابجایی ۶ میلی متر با پروب به قطر ۲ میلی متر (P/2) انجام گرفت. مقادیر نیروی نفوذ با دقت ۱/۰ گرم، جابجایی پروب با دقت ۰۰۱/۰ میلی متر و زمان نفوذ با دقت ۰۰۱/۰ ثبت گردید. از روی نمودارهای نیرو- زمان حداکثر نیروی نفوذ بر حسب گرم نیرو، محاسبه شد (Vargas et al., ۲۰۰۶).
۳- ۴- ۶- اندازه گیری رنگ میوه
برای اندازه گیری رنگ میوه از دستگاه CHROMA METER CR- 400، ساخت ژاپن استفاده شد. که با شاخص های هانتر L a/b، تغییرات رنگی میوه مشخص گردید. L (Lightness) نماد روشنایی رنگ (از L= 0 برای سیاه تا L= 100 برای سفید) a (Redness) نماد سبزی تا قرمزی رنگ (a= -60 برای سبز و a= +60 برای قرمز) و b (Yellowness) نماد آبی تا زرد (از b= -60 برای آبی تا b= +60 برای زرد) می­باشد (Yam and Papadakis, 2004).

شکل ۳-۱- دیاگرام فضای رنگی هانتر (L, a, b)
۳- ۴- ۷- اندازه گیری محتوای فنل کل
اندازه گیری ترکیبات فنلی با بهره گرفتن از روش فولین سیوکالتو^[۹۲] به شرح زیر انجام شد: ابتدا آب میوه انگور به نسبت ۱۰ درصد با آب مقطر رقیق شد و از کاغذ صافی عبور داده شد و سپس مورد استفاده قرار گرفت. ۱میلی لیتر آب میوه انگور، مقادیر مختلف استاندارد اسید گالیک، ۱میلی لیتر شاهد^[۹۳] (آب مقطر یا دیونیزه) در بشر ۱۰۰ میلی لیتری ریخته شد و۷۰ میلی لیتر آب به آن اضافه شد، به دنبال آن ۵ میلی لیتر واکنش گر فولین سیوکالتو با مخلوط مورد نظر مخلوط گردید و به مدت ۳ تا ۵ دقیقه در دمای اتاق قرار داده شد سپس ۱۵ میلی لیتر محلول کربنات سدیم به آن اضافه شد و با آب به حجم ۱۰۰ میلی لیتر رسانده شد و به مدت ۲ ساعت در دمای اتاق قرار گرفت. ۴ میلی لیتر محلول تهیه شده در دستگاه اسپکتروفتومتر مدل (pharmacia LKB. Novaspec II) ریخته و جذب آن در طول موج ۷۶۵ نانومتر قرائت شد (Waterhouse et al.,2002).
۳- ۴- ۷- ۱- تهیه محلول کربنات سدیم
۲۰۰گرم کربنات سدیم بدون آب^[۹۴] در ۸۰۰ میلی لیتر آب حل و جوشانده شد. بعد از سرد شدن تعدادی کریستال کربنات سدیم داخل محلول ریخته شد و به مدت ۲۴ ساعت در دمای اتاق نگه داری گردید. سپس با بهره گرفتن از کاغذ صافی فیلتر و به حجم ۱ لیتری رسانیده شد. این محلول در دمای اتاق به مدت نا محدود قابل نگهداری می­باشد.
۳- ۴- ۷- ۲- رسم منحنی استاندارد اسید گالیک
جهت رسم منحنی استاندارد اسید گالیک^[۹۵] محلول پایه­ای از اسید گالیک به غلظت ۵ گرم در لیتر تهیه شد. به این ترتیب که ابتدا ۵/۰ گرم از اسید گالیک در ۱۰ میلی لیتر اتانول حل گردید و سپس با آب به حجم ۱۰۰ میلی لیتر رسانیده شد. مقادیر ۰، ۵/۰، ۱، ۲، ۳، ۵ و ۱۰ میلی لیتر(که به ترتیب ۰، ۲۵، ۵۰، ۱۰۰، ۱۵۰، ۲۵۰ و ۵۰۰ میلی گرم در لیتر می باشند) را از این محلول برداشته و با آب به حجم ۱۰۰ میلی لیتر رسانیدیم. این محلول ها در اسپکترو فتومتر در طول موج ۷۶۵ نانومتر قرار داده شدند و اعداد بدست آمده ثبت شد و منحنی استاندارد با بهره گرفتن از آنها رسم گردیدد. منحنی استاندارد بر اساس غلظت های اسید گالیک و مقادیر جذب بدست آمده، رسم گردید (نمودار ۳-۱). سپس با قرار دادن اعداد بدست آمده برای نمونه ها در منحنی استاندارد مقدار فنل کل در هر یک از عصاره ها برحسب معادل اسید گالیک محاسبه گردید و بصورت معادل میلی گرم در لیتر اسید گالیک (GAE) بیان شد.
نمودار ۳-۱- منحنی جذب استاندارد اسید گالیک
۳- ۴- ۸- تعیین میزان فعالیت آنتی اکسیدان کل عصاره میوه
برای تعیین میزان آنتی اکسیدان کل از روش فرپ^[۹۶] استفاده شد. به منظور تهیه محلول پایه ۱/۳ گرم استات سدیم^[۹۷] و ۱۶ میلی لیتر اسید استیک گلایسیال در یک لیتر آب مقطر حل شد و pH محلول در حدود ۶/۳ تنظیم شد(بافر استات) سپس ۳۱ میلی گرم TPTZ^[98] در ۱۰ میلی لیتر اسید کلریدریک ۴۰ میلی مولار حل شد و به منظور تهیه محلول ۲۰ میلی مولار کلرید آهن^[۹۹]، ۴۱/۵ گرم کلرید آهن در یک لیتر آب مقطر حل شد. به منظور تهیه محلول استاندارد از سولفات آهن^[۱۰۰] استفاده شد که ۲۷۸/۰ گرم سولفات آهن در یک لیتر آب مقطر حل شد و در نهایت محلول های استاندارد ۱۲۵، ۲۵۰، ۵۰۰ و ۱۰۰۰ میکرومولار(هفتگی تهیه شود) تهیه شد. محلول نهایی کار FRAPبا مخلوط کردن ۲۵ میلی لیتر بافر، ۵/۲میلی لیتر TPTZ و۵/۲ میلی لیتر کلرید آهن آماده شد سپس ۲۵۰ میکرولیتر از محلول کار داخل ظروف پلت ریخته شد و به آن ۱۰ میکرولیتراز عصاره میوه (که حاوی ۵/۲ میلی لیتر عصاره و ۶ میلی لیتر بافر فسفات بود) اضافه شد و به مدت ۱۰ دقیقه در دمای۳۷ درجه سانتی گراد قرار داده سپس در اسپکتروفوتومتر در طول موج ۵۹۳ نانومتر میزان جذب خوانده شد و در نهایت با رسم منحنی استاندارد میزان آنتی اکسیدان کل بر حسب معادل آهن بدست آمد و بر حسب معادل میلی مول آهن در ۱۰۰ گرم وزن تر بیان شد (;Toivonen et al., 2008 Benzie and Strain, 1996).
نمودار ۳-۲- منحنی جذب استاندارد سولفات آهن
۳- ۴- ۹- اندازه گیری ریزش حبه
خوشه انگور را با یک دست گرفته و با دست دیگر ۳ ضربه یکنواخت با فاصله مشخص به پشت دست زده و حبه های ریزش یافته را شمارش کرده و در نهایت درصد ریزش حبه محاسبه گردید (Moyls et al., ۱۹۹۶).
۳- ۴- ۱۰- اندازه گیری طول و عرض خوشه
طول و عرض خوشه با بهره گرفتن از کولیس با دقت یک صدم بر حسب سانتی متر اندازه گیری شد (بداقی و همکاران،۱۳۸۷).
۳- ۴- ۱۱- اندازه گیری وزن بیست حبه و خوشه
برای اندازه گیری وزن بیست حبه و خوشه از ترازوی حساس دیجیتال که دقت آن در حد یک صدم گرم بود استفاده شد (بداقی و همکاران، ۱۳۸۷).
۳- ۵- تجزیه و تحلیل داده‌ها
داده‌های حاصل از آزمایش با بهره گرفتن از نرم‌افزارکامپیوتری MSTAT-C، مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت و برای رسم نمودارها از نرم افزار Microsoft Office Excel 2007 استفاده شد. برای مقایسه میانگین‌ها از آزمون چند دامنه­ای دانکن استفاده گردید.
فصل چهارم
نتایج
۴- ۱- نتایج حلقه برداری و محلول پاشی اتفن و اثر متقابل آنها بر صفات کمی و کیفی اندازه گیری شده میوه انگور ریش بابا قرمز در زمان برداشت
نتایج تجزیه واریانس اثر تیمارهای حلقه برداری، اتفن و اثر متقابل آنها بر صفات اندازه گیری شده (مواد جامد محلول، اسیدیته قابل تیتراسیون، ضریب رسیدگی، pH، طول و عرض خوشه) میوه انگور رقم ریش بابا قرمز، در جدول (۴-۱)، نتایج تجزیه واریانس صفات اندازه گیری شده (وزن ۲۰ حبه، وزن خوشه، ریزش حبه، سفتی بافت، ترکیبات فنولی کل و آنتی اکسیدان کل) در جدول (۴-۲) و نتایج تجزیه واریانس تغییرات رنگ میوه در جدول (۴-۳) نشان داده شده است.
نتایج نشان داد که تیمار حلقه برداری اثر معنی داری روی مواد جامد محلول، اسیدیته قابل تیتراسیون، ضریب رسیدگی، وزن ۲۰ حبه، وزن خوشه، ریزش حبه، ترکیبات فنولی کل، آنتی اکسیدان کل و تغییرات رنگی میوه داشته در حالی که روی صفات ( pH، طول خوشه، عرض خوشه و سفتی بافت) اثر معنی داری نداشته است.